PERANANAN MICROORGANISME

• Bakteri Gram-negatif adalah bakteri yang tidak mempertahankan zat warna metil ungu pada

  metode pewarnaan Gram. Bakteri gram-positif akan mempertahankan zat warna metil ungu

  gelap setelah dicuci dengan alkohol, sementara bakteri gram-negatif tidak. Pada uji

  pewarnaan Gram, suatu pewarna penimbal (counterstain) ditambahkan setelah metil ungu,

  yang membuat semua bakteri gram-negatif menjadi berwarna merah atau merah muda.

  Pengujian ini berguna untuk mengklasifikasikan kedua tipe bakteri ini berdasarkan perbedaan

  struktur dinding sel mereka.

  Pengecatan gram dilakukan dalam 4 tahap yaitu

  1. Pemberian cat warna utama (cairan kristal violet) berwarna ungu.

  2. Pengintesifan cat utama dengan penambahan larutan mordan JKJ.

  3. Pencucian (dekolarisasi) dengan larutan alkohol asam.

  4. Pemberian cat lawan yaitu cat warna safranin

  Perbedaan dasar antara bakteri gram positif dan negatif adalah pada komponen dinding

  selnya. Kompleks zat iodin terperangkap antara dinding sel dan membran sitoplasma

  organisme gram positif, sedangkan penyingkiran zat lipida dari dinding sel organisme gram

  negatif dengan pencucian alcohol memungkinkan hilang dari sel. Bakteri gram positif

  memiliki membran tunggal yang dilapisi peptidohlikan yang tebal (25-50nm) sedangkan

  bakteri negative lapisan peptidoglikogennya tipis (1-3 nm).

  Sifat bakteri terhadap pewarnaan Gram merupakan sifat penting untuk membantu determinasi

  suatu bakteri. Beberapa perbedaan sifat yang dapat dijumpai antara bakteri Gram positif dan

  bakteri Gram negatif yaitu:

  Ciri-ciri bakteri gram negatif yaitu:

   Struktur dinding selnya tipis, sekitar 10 – 15 mm, berlapis tiga atau multilayer.

   Dinding selnya mengandung lemak lebih banyak (11-22%), peptidoglikan terdapat

  didalam

   lapisan kaku, sebelah dalam dengan jumlah sedikit ± 10% dari berat kering, tidak

  mengandung asam tekoat.

   Kurang rentan terhadap senyawa penisilin.

   Pertumbuhannya tidak begitu dihambat oleh zat warna dasar misalnya kristal violet.

   Komposisi nutrisi yang dibutuhkan relatif sederhana.

   Tidak resisten terhadap gangguan fisik.

   Resistensi terhadap alkali (1% KOH) lebih pekat

   Peka terhadap streptomisin

   Toksin yang dibentuk Endotoksin
• 

  Ciri-ciri bakteri gram positif yaitu:

   Struktur dinding selnya tebal, sekitar 15-80 nm, berlapis tunggal atau monolayer.

   Dinding selnya mengandung lipid yang lebih normal (1-4%), peptidoglikan ada yang

  sebagai lapisan tunggal. Komponen utama merupakan lebih dari 50% berat ringan.

  Mengandung asam tekoat.

   Bersifat lebih rentan terhadap penisilin.

   Pertumbuhan dihambat secara nyata oleh zat-zat warna seperti ungu kristal.

   Komposisi nutrisi yang dibutuhkan lebih rumit.

   Lebih resisten terhadap gangguan fisik.

   Resistensi terhadap alkali (1% KOH) larut

   Tidak peka terhadap streptomisin

   Toksin yang dibentuk Eksotoksin Endotoksin

  2. Pewarnaan Tahan Asam

  Pewarnaan ini ditujukan terhadap bakteri yang mengandung lemak dalam konsentrasi tinggi

  sehingga sukar menyerap zat warna, namun jika bakteri diberi zat warna khusus misalnya

  karbolfukhsin melalui proses pemanasan, maka akan menyerap zat warna dan akan tahan

  diikat tanpa mampu dilunturkan oleh peluntur yang kuat sekalipun seperti asam-alkohol.

  Karena itu bakteri ini disebut bakteri tahan asam (BTA).

  Teknik pewarnaan ini dapat digunakan untuk mendiagnosa keberadaan bakteri penyebab

  tuberkulosis yaitu Mycobacterium tuberculosis . Ada beberapa cara pewarnaan tahan asam,

  namun yang paling banyak adalah cara menurut Ziehl-Neelsen.

  3. Pewarnaan khusus

  Untuk melihat struktur tertentu : pewarnaan flagel, pewarnaan spora, pewarnaan

  kapsul.

  a. Pewarnaan Spora

  Spora bakteri (endospora) tidak dapat diwarnai dengan pewarnaan biasa, diperlukan

  teknik pewarnaan khusus. Pewarnaan Klein adalah pewarnaan spora yang paling banyak

  digunakan.Endospora sulit diwarnai dengan metode Gram. Untuk pewarnaan endspores,

  perlu dilakukan pemanasan supaya cat malachite hijau bisa masuk ke dalam spora , seperti

  halnya pada pewarnaan Basil Tahan Asam dimana cat carbol fuschsin harus dipanaskan

  untuk bisa menembus lapisan lilin asam mycolic dari Mycobacterium .

  Prinsip kerja:
• Spora kuman mempunyai dinding yang tebal sehingga diperlukan pemanasan agar

  pori-pori membesar zat warna fuchsin dapat masuk, dengan pencucian pori-pori kembali

  mengecil menyebabkan zat warna fuchsin tidak dapat dilepas walaupun dilunturkan dengan

  asam alkohol, sedangkan pada badan bakteri warna fuchsin dilepaskan dan mengambil warna

  biru dari methylen blue.

  b. Pewarnaan flagel

  Pewarnaan flagel dengan memberi suspense koloid garam asam tanat yang tidak

  stabil, sehingga terbentuk presipitat tebal pada dinding sel dan flagel.

  c. Pewarnaan kapsul

  Pewarnaan ini menggunakan larutan Kristal violet panas, lalu larutan tembaga sulfat

  sebagai pembilasan menghasilkan warna biru pucat pada kapsul, karena jika pembilasan

  dengan air dapat melarutkan kapsul. Garam tembaga juga memberi warna pada latar

  belakang. Yang berwana biru gelap.

  4. Pewarnaan khusus untuk melihat komponen lain dan bakteri :

   pewarnaan Neisser (granula volutin),

   pewarnaan yodium (granula glikogen).

  5. Pewarnaan negatif

  Pewarnaan negatif, metode ini bukan untuk mewarnai bakteri tetapi mewarnai latar

  belakangnya menjadi hitam gelap. Pada pewarnaan ini mikroorganisme kelihatan transparan

  (tembus pandang). Teknik ini berguna untuk menentukan morfologi dan ukuran sel. Pada

  pewarnaan ini olesan tidak mengalami pemanasan atau perlakuan yang keras dengan bahan-

  bahan kimia, maka terjadinya penyusutan dan salah satu bentuk agar kurang sehingga

  penentuan sel dapat diperoleh dengan lebih tepat. Metode ini menggunakan cat nigrosin atau

  tinta cina. Pewarnaan negatif memerlukan pewarna asam seperti eosin atau negrosin.pewarna

  asam memiliki negatif charge kromogen,tidak akan menembus atau berpenetrasi ke dalam sel

  karena negative charge pada permukaan bakteri. oleh karena itu, sel tidak berwarna mudah

  dilihat dengan latar belakang berwarna